{"id":776,"date":"2015-02-27T10:52:53","date_gmt":"2015-02-27T10:52:53","guid":{"rendered":"https:\/\/scienzaegoverno.org\/book\/463-diagnostica-rapida-e-precoce\/"},"modified":"2023-09-13T16:58:49","modified_gmt":"2023-09-13T14:58:49","slug":"463-diagnostica-rapida-e-precoce","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.scienzaegoverno.org\/?p=776","title":{"rendered":"4.6.3. Diagnostica rapida e precoce"},"content":{"rendered":"

Un gruppo internazionale di ricerca formato da ricercatori greci del \u201cBenaki Phytopathological Institute<\/em>\u201d di Atene e spagnoli del \u201cInstituto Valenciano de Investigaciones Agrarias<\/em> (IVIA)\u201d di Valencia ha messo a punto un metodo diagnostico rapido, sensibile e affidabile per l’identificazione simultanea dei pi\u00f9 importanti viroidi e citoplasmi delle Pomacee<\/em>, in particolare del melo e del pero.<\/p>\n

L\u2019articolo riportante i risultati della ricerca \u00e8 stato pubblicato ad inizio dicembre su PublMed, <\/em>rivista on line del \u201cUS National Library of Medicine – National Institutes of Health<\/em>\u201d.<\/p>\n

Le Pomaceae <\/em>sono suscettibili a diverse malattie causate da virus, viroidi e fitoplasmi, trasmesse da piante infette. Una via di diffusione comune \u00e8 quella dell\u2019impiego di piante infette negli innesti. Fra i patogeni trasmessi in questo modo ci sono:<\/p>\n

cancro bolloso del pero<\/u> (PBCVd – Pear blister canker viroid<\/em> ), viroide;<\/p>\n

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Pero affetto da PCVDb)<\/p>\n

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ulcerazione della mela<\/u> (ASSVd – Apple scar skin viroid),<\/em> viroide;<\/p>\n

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Mela affetta da ASSVd
\n\tCrediti immagine: Oregon State University<\/em><\/p>\n

Candidatus<\/u><\/em> Phytoplasma mali<\/u> (Ca. P. mali) ovvero l\u2019agente degli scopazzi del melo;<\/p>\n

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Le foglie malate (a sx) sono pi\u00f9 piccole  di quelle sane (a dx)
\n\tCrediti immagine: EPPO<\/em><\/p>\n

Candidatus<\/u><\/em> Phytoplasma pyri<\/u> (Ca. P. pyri) ovvero l\u2019agente della moria del pero.<\/p>\n

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Pero affetto da Candidatus Phytoplasma
\n\tCrediti immagine: L.Giunchedi – Universit\u00e0 di Bologna<\/em><\/p>\n

Nonostante i fitoplasmi sopra citati siano regolamentati in Europa come patogeni da quarantena, non sempre \u00e8 possibile effettuare analisi complete, veloci ed affidabili.
\n\tI ricercatori hanno messo a punto una procedura di analisi basata sulla tecnica RT-qPCR per la rilevazione simultanea di viroidi e fitoplasmi di melo e pero.
\n\tLa RT-qPCR \u00e8 una PCR quantitativa in tempo reale (RT-qPCR, real time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction).
\n\t<\/em>La PCR \u00e8 una tecnica di biologia molecolare che consente la moltiplicazione (amplificazione) di frammenti di acidi nucleici dei quali si conoscano le sequenze nucleotidiche iniziali e terminali. Questa tecnica consente di ottenere in vitro molto rapidamente la quantit\u00e0 di materiale genetico necessaria per le successive applicazioni e\/o analisi.
\n\tNel caso di RT-qPCR, la PCR viene accoppiata con un metodo di analisi del DNA: si ha quindi un\u2019amplificazione del DNA e, dopo ogni turno di amplificazione, una sua quantificazione. La tecnica Retro Trascrizionale (RT-PCR) permette di misurare l’espressione relativa di un gene ad un tempo particolare, o in una cellula o in un tipo particolare di tessuto.<\/p>\n

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Schema di funzionamento della tecnica RT-qPCR
\n\tCredi immagine: Thermo Scientific<\/em><\/p>\n

 Per la quantificazione del DNA si usano diverse tecniche basate sull’uso di colorazioni fluorescenti. In particolare, nella procedura messa a punto dai ricercatori greci e spagnoli, per l\u2019identifcazione del DNA si \u00e8 usata la sonda \u201cTaqMan\u201d. Questa sonda \u00e8 in grado di contenere due fluorocromi e quindi da il vantaggio di rilevare contemporaneamente pi\u00f9 di una sequenza in una sola reazione.<\/p>\n

In questo caso specifico la tecnica RT-qPCR con sonda TaqMan permette l’identificazione degli RNA dei viroidi e del DNA dei fitoplasmi nel corso della stessa reazione.<\/p>\n

Dai dati ottenuti nel corso delle varie sperimentazioni, il gruppo di ricerca internazionale afferma che la tecnica RT-qPCR messa a punto nel corso di questo studio per la rilevazione simultanea di viroidi e fitoplasmi di melo e pero costituisce uno strumento diagnostico in grado di facilitare i controlli su larga scala sia per la gestione della malattia sia per la propagazione di materiale vivaistico sano certificato.<\/p>\n

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